ELISA實(shí)驗(yàn)中基質(zhì)效應(yīng)該如何避免

在ELISA實(shí)驗(yàn)的時候，我們經(jīng)常會遇到樣品濃度挨近試劑盒的靈敏度，容易發(fā)生樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象，特別是在血清和血漿樣本中。這就有可能是基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的結(jié)果。

什么是基質(zhì)效應(yīng)呢？

首先我們要知道什么是基質(zhì)，基質(zhì)是指樣品中目標(biāo)分析物以外的部分。由于基質(zhì)成分會對分析過程有顯著干擾，影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。業(yè)內(nèi)把這些影響統(tǒng)稱為基質(zhì)效應(yīng)。這是ELISA試劑盒開發(fā)和使用中需要避開的雷。

如何判斷是否是基質(zhì)效應(yīng)呢？

當(dāng)單個樣本或少量樣本值低于空白值時，可能是實(shí)驗(yàn)操作出現(xiàn)問題，這時應(yīng)增加重復(fù)，進(jìn)步操作技術(shù)。當(dāng)許多樣本都低于空白值時，應(yīng)思考基質(zhì)效應(yīng)的影響，建立校正曲線予以修改。基質(zhì)效應(yīng)的原因錯綜復(fù)雜，有可能是樣品中存在的基質(zhì)導(dǎo)致原抗體的聯(lián)絡(luò)結(jié)合能力下降，便產(chǎn)生了樣本值低于空白值的現(xiàn)象。導(dǎo)致樣本值無法計(jì)算出數(shù)值，或許數(shù)值為負(fù)。

雖然原因復(fù)雜，但有方法可以用來評估基質(zhì)效應(yīng)。

種方法是采用線性稀釋，一般來講，抗原和捕獲抗體、檢測抗體之間的結(jié)合作用很強(qiáng)，樣品濃度被稀釋并不影響它們的結(jié)合，而造成基質(zhì)效應(yīng)的非特異結(jié)合的力要弱很多，如果不斷稀釋樣品，非特異結(jié)合造成的干擾會逐步減少，測量值也更接近真實(shí)值。沒有基質(zhì)效應(yīng)時，無論如何稀釋，測量值都和真實(shí)值吻合。而有基質(zhì)效應(yīng)時，稀釋會造成非特異性結(jié)合比例的減少，測量值也相應(yīng)地產(chǎn)生很大改變。

第二種方法是摻入回收率實(shí)驗(yàn)，將低、中和高濃度的分析物摻入到已測定過濃度的樣本中，摻入前后實(shí)測到的濃度增加部分與摻入濃度之比就是回收率，回收率以百分比的形式呈現(xiàn)。回收率介于80-120%，才符合標(biāo)準(zhǔn)。

那我們?nèi)绾伪苊?strong>ELISA實(shí)驗(yàn)中基質(zhì)效應(yīng)？

基質(zhì)效應(yīng)可以通過產(chǎn)品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。

上海研域生物針對ELISA產(chǎn)品研發(fā)進(jìn)行了多種優(yōu)化。ELISA試劑盒在開發(fā)進(jìn)程中，標(biāo)準(zhǔn)品不選用人或動物血清、血漿作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。我們量身定制的緩沖液系統(tǒng)，這些優(yōu)化后的緩沖液體系能很好消除基質(zhì)效應(yīng)。還有當(dāng)檢測某個分析物時，其他相關(guān)因子或類似結(jié)構(gòu)因子如果有非特異性結(jié)合，也會導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)，我們也因此做了大量的交叉反應(yīng)，確保沒有明顯的交叉反應(yīng)和干擾。而且我們試劑盒必須通過嚴(yán)格的基質(zhì)效應(yīng)測試，全部包括線性稀釋和摻入回收率實(shí)驗(yàn)，并把測試結(jié)果記錄在說明書中。